КАРТОЧКА ПРОЕКТА ФУНДАМЕНТАЛЬНЫХ И ПОИСКОВЫХ НАУЧНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ,
ПОДДЕРЖАННОГО РОССИЙСКИМ НАУЧНЫМ ФОНДОМ

Информация подготовлена на основании данных из Информационно-аналитической системы РНФ, содержательная часть представлена в авторской редакции. Все права принадлежат авторам, использование или перепечатка материалов допустима только с предварительного согласия авторов.

 

ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ

Номер 15-14-00016

НазваниеМолекулярные механизмы активации врожденного и адаптивного иммунного ответа при вирусных геморрагических лихорадках

РуководительРизванов Альберт Анатольевич, Доктор биологических наук

Организация финансирования, регион федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Казанский (Приволжский) федеральный университет", Республика Татарстан (Татарстан)

Период выполнения при поддержке РНФ 2015 г. - 2017 г. 

Конкурс№6 - Конкурс 2015 года «Проведение фундаментальных научных исследований и поисковых научных исследований по приоритетным тематическим направлениям исследований».

Область знания, основной код классификатора 04 - Биология и науки о жизни, 04-208 - Молекулярная биология

Ключевые словавирусные геморрагические лихорадки, хантавирус, конго-крымская геморрагическая лихорадка, лихорадка денге, вирус, иммунитет, антитела, цитотоксические лимфоциты, цитокины

Код ГРНТИ34.15.33

СтатусУспешно завершен

 

ИНФОРМАЦИЯ ИЗ ЗАЯВКИ

Аннотация
Вирусные геморрагические лихорадки (ВГЛ) представляют из себя группу инфекционных заболеваний, вызываемых оболочечными РНК- вирусами, принадлежащими к различным семействам: аренавирусы, буньявирусы, филовирусы и флавивирусы. Большинство ВГЛ являются зоонозными заболеваниями. В настоящее время по разным оценкам ежегодно регистрируется от 50 до 100 миллионов случаев ВГЛ в мире (BMJ. 2002 Jun 29;324(7353):1563-6). Случаи ВГЛ регистрируются по всему миру и обычно совпадают с ареалами обитания носителей и/или переносчика вируса. Однако недавняя вспышка лихорадки Эбола показала, как легко ВГЛ могут распространяться за пределы зоонозного ареала. Несмотря на то, что вирус является эндемичным на территории группы государств Африканского континента, заболевание было диагностировано в США и Европе. Глобализация экономики и расширение человеческих контактов будет и в дальнейшем определять распространение ВГЛ за пределы зоонозных очагов. Поэтому остро стоит проблема изучения молекулярных механизмов противовирусной защиты для последующей разработки средств лечения и профилактики ВГЛ. На территории России зарегистрированы зоонозные очаги геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС) (территория между Волгой и Уралом, а также Дальний Восток) и Конго-Крымской лихорадки (ККЛ) (Юг России, Крымский полуостров). В совокупности, десятки тысяч случаев ВГЛ регистрируется на территории Российской Федерации ежегодно с частотой смертельных случаев доходящей до 5%. Следует отметить, что увеличение экономических связей и расширение туристических контактов между различными странами и континентами остро ставит вопрос о возможности заражения граждан России ВГЛ за пределами Российской Федерации. А также увеличивает риск распространения экзотических ВГЛ на территории Российской Федерации. К сожалению, для многих ВГЛ не существует специфических и эффективных методов лечения, поэтому терапия в основном симптоматическая, что зачастую определяет высокую смертность, доходящую до 50%. Также, зачастую методы профилактики ВГЛ отсутствуют. Поэтому вопросы разработки методов терапии и профилактики ВГЛ являются актуальными и представляют научное и практическое значение. Поражение проницаемости эндотелиального барьера, приводящее к отеку тканей, миграции лейкоцитов и кровоизлияниям, обнаруживается при всех ВГЛ. Геморрагические нарушения характеризуются существенным снижением количества циркулирующих тромбоцитов у всех больных ВГЛ (Clin Microbiol Rev. Jul 1998; 11(3): 480–496; American Journal of Kidney Diseases, Vol 31, No 1 (January), 1998: pp 116-120; Eur J Clin Microbiol Infect Dis. 33:2149-56). Более того, в некоторых случаях, ВГЛ характеризуются серьезными гемодинамическими нарушениями, вплоть до развития ДВС-синдрома (диссеминированное внутрисосудистое свёртывание) (Scand J Infect Dis. 2000;32(2):125-32; Am J Trop Med Hyg. 1977 May;26(3):525-32.; BMC Infect Dis. 2014 Jul 28;14:416. doi: 10.1186/1471-2334-14-416). Следует отметить, что патогенез ДВС-синдровма при ВГЛ остается неизвестным. Кроме того, не всегда лечение ВГЛ противовирусными препаратами (ИФН-альфа, Рибавирин) приводило к снижению тяжести заболевания и предотвращению геморрагического синдрома. Поэтому, нами сделано предположение, что вирусная инфекция активирует эндотелиальные клетки, приводя к увеличению продукции биологически активных веществ, снижающих барьерную функцию эндотелия. К числу таких агентов можно отнести тромбоспондин-1, матричные металлопротеазы, ингибитор активации плазминогена (PAI-1 – от англ. plasminogen activator inhibitor) и цитокины. Несмотря на то, что накоплен обширный материал по активации цитокинов при различных ВГЛ, данные по активации тромбоспондина-1, матричных металлопротеаз и PAI-1 носят разрозненный и бессистемный характер. Однако, изменения в активности тромбоспондина-1, матричных металлопротеаз и PAI-1 оказывают значительное влияние на проницаемость эндотелия и развитие гемодинамических нарушений, включая геморрагический синдром. Поэтому изучение изменений в активности этих белков является актуальным с фундаментальной и прикладной точки зрения. Нарушение эндотелиальной целостности при ВГЛ может быть результатом цитотоксического действия вирус специфичных цитотоксических лимфоцитов (ЦТЛ) и/или натуральных киллеров (НК) (2009, Int. J. Infect. Dis. 13:560-563; 2009, Int. J. Infect. Dis. 13:560-563; 2008, J. Clin. Virol. 42:415-417). Поэтому можно сделать предположение о решающей роли иммунных эффекторных клеток в патогенезе геморрагического синдрома. В подтверждение этого предположения, Ennis и коллеги показали циркуляцию ЦТЛ у больных ХЛС, способных к распознаванию и уничтожению эндотелиальных клеток, зараженных вирусом (Virology. 1997 Nov 24;238(2):380-90.). Однако, до сих пор остаются неизвестными вирусные антигенные эпитопы, распознаваемые ЦТЛ на поверхности инфицированных эндотелиальных клеток. Актуальность выявления иммуногенных вирусных эпитопов заключается в том, что они могут быть использованы в качестве минимальных вакциногенных единиц при разработке вакцин на основе вирусных пептидов. Научная новизна предлагаемого проекта заключается в комплексном подходе в изучении фундаментальных молекулярных механизмов патогенеза ВГЛ. Комплексность подхода заключается в том что, во первых, предполагается изучение нескольких механизмов, влияющих на проницаемость эндотелия и развитие геморрагического синдрома у больных ВГЛ. Во вторых, впервые будет проведен корреляционный анализ между цитокиновым профилем у больных геморрагической лихорадкой, факторами, определяющими эндотелиальную проницаемость, контролирующими свертываемость крови и развитие геморрагического синдрома. В третьих, предлагается комплексный подход к изучению влияния экспрессии различных белков одного штамма вируса на молекулярные механизмы внутриклеточной активации в эндотелиальных клетках. Кроме того, впервые будет произведен сравнительный анализ влияния экспресcии белков вирусов, принадлежащих семействам буньявирусы (ханавирусы и вирус конго-крымской геморрагической лихорадки) и флавивирусы (вирус денге) на молекулярные механизмы внутриклеточной активации в эндотелиальных клетках. В четвертых, впервые будет произведен анализ иммуногенной значимости пептидов, синтезированных на основании аминокислотных последовательностей различных белков ВГЛ, в том числе нуклеокапсидного белка вируса Пумала, являющегося основным инфекционным агентом, вызывающим геморрагическую лихорадку в Поволжье. Планируется провести расширенное изучение гуморальной и клеточной реактивности сывороток от больных с ВГЛ к пептидам, синтезированным на основании аминокислотных последовательностей белков ВГЛ.

Ожидаемые результаты
Вирусы, вызывающие геморрагические лихорадки, относятся к инфекционным агентам, работа с которыми возможна только в лабораториях при наличии 1 или 2 уровня защиты. Поэтому, исследования в области ВГЛ могут проводиться только в ограниченном круге лабораторий по всему миру. Однако, использование лентивирусных конструкций, экспрессирующих вирусные белки, позволяет проводить исследование патогенеза ВГЛ в лабораториях с меньшей степенью защиты. Лентивирусные конструкции основаны на использовании репликационно дефектного вируса, не способного к продукции инфекционного вируса. Поэтому эти конструкции являются удобным инструментом для экпрессии белков вирусов высокой категории патогенности в условиях 3 и 4 уровня защиты. К сожалению в настоящее время в России отсутствуют подобные конструкции, что значительно затрудняет проведение работ по изучению патогенеза вирусов высокой категории патогенности (1 и 2 уровни защиты). Поэтому, разработка подобных лентивирусных конструкции представляет большую интелектуальную и прикладную значимость. Подобные конструкций могут быть использованы во многих лабораториях по всей России. В результате исполнения заявленного проекта будут получены лентивирусные конструкции, кодирующи гены N, G1 и G2 белков вирусов Пумала, Добрава, Андес, Хантаан и Проспект Хилл, вируса Конго-Крымской лихорадки и денге, которые в последующем будут использованы для экспресии соответствующих белков указанных вирусов в клетках мишенях. В настоящее время активация цитокинов в эндотелиальных клетках инфицированных ВГЛ является хорошо установленным фактом. К примеру, наши данные показали активацию множества цитокинов в эндотелиальных клетках инфицированных различными хантавирусами (Viral Immunol. 2004;17(2):234-51; Antivir Ther. 2013;18(4):575-84). Также нами была показа активация панели цитокинов в эндотелиальных клетках инфицированных вирусом желтой лихорадки (Virology. 2005 Nov 25;342(2):167-76). Однако роль индивидуальных вирусных белков в активации цитокинового профиля в эндотелиальных клетках остается неизвестной. Также активация белков отвечающих за реологические свойства крови и участвующих в патогенезе геморрагического синдрома остается мало исследованной. В результате исполнения данного проекта нами планируется получить результаты по влиянию экспресии вышеуказанных белков ВГЛ на активацию цитокинов, экспрессию белков PECAM-1, ангиопоэтин-2, тромбоспондин-1, PAI-1 в эндотелиальных клетках человека. Также, будут получены результаты по влиянию экспрессии указанных вирусных белков на экспрессию матричных металлопротеаз в трансдуцированных эндотелиальных клетках. Далее, будет изучена активация PECAM-1, ангиопоэтина-2, тромбоспондина-1, PAI-1, матричных металлопротеаз и цитокинов в зависимости от штамма вируса, его принадлежности к различным семействам и тяжести заболевания, вызываемого у человека. Еще одним неизученным аспектом патогенеза ВГЛ является отсутствие понимания активации внутриклеточных регуляторных белков. Активация регуляторных белков может существенным образом влиять на вирусную репликацию. Так, например, нами было показано, что интерферон зависимые белки (МхА, НЕМ45, ОАS) и PML активируются в эндотелиальных клетках, инфицированных хантавирусами (J Med Virol. 2005 Feb;75(2):267-75; Virology. 2013 Sep 1;443(2):338-48.). Однако, отсутствуют данные по активации подобных регуляторных белков в эндотелиальных клетках, инфицированных вирусами Пумала, Добрава, Хантаaн и Проспект Хилл, вируса Конго-Крымской лихорадки и денге. Более того, отсутствуют данные о роли индивидуальных вирусных белков в активации внутриклеточных регуляторных протеинов. Одной из значимых частей предлагаемого исследования является изучение активации внутриклеточных белков, включая PML, интерферон зависимые белки (МхА, НЕМ45, ОАS), IRF3, IRF5, TLR3, TLR7 и TLR9) в эндотелиальных клетках, трансдуцированных белками N, G1 и G2 вирусов Пумала, Добрава, Андес, Хантаaн и Проспект Хилл, вируса Конго-Крымской лихорадки и денге. Более того, планируется получить результаты по влиянию активации регуляторных белков на эффективность вирусной репликации. Для этого будет использован современный подход с использованием коротких интерферирующих РНК (siRNA). Будет получены результаты по влиянию супрессии PML, МхА, НЕМ45, ОАS, IRF3, IRF5, TLR3, TLR7 и TLR9 с помощью соответствующих siRNA на экспрессию N, G1 и G2 белков вирусов Пумала, Добрава, Андес, Хантаaн и Проспект Хилл, вируса Крымской Конго лихорадки и лихорадки денге. Будет проведен анализ зависимости экспрессии PML, МхА, НЕМ45, ОАS, IRF3, IRF5, TLR3, TLR7 и TLR9 на эффективность наработки вирусных белков, а также возможности новых терапевтических подходов для лечения ВГЛ путем изменения экспрессии указанных внутриклеточных регуляторных белков. Общепризнанным считается, что иммунный ответ к вирусным белкам может существенно влиять на патогенез ВГЛ. Наиболее ярким примером этого является лихорадка денге, где повторное инфицирование может приводить к более тяжелым последствиям по сравнению с первичной инфекцией (Arch Virol. 2013 Jul;158(7):1445-59). Защитная роль иммунитета признана при ГЛПС, когда иммунный ответ на первичную инфекцию защищает организм от повторной инфекции (J Virol Methods. 1989 Feb;23(2):195-203). В то же время, существуют данные указывающие на возможное влияние цитотоксических иммунных клеток на тяжесть хантавирусного легочного синдрома (J Gen Virol. 2004 Jul;85(Pt 7):1909-19.). Несмотря на прогресс в нашем понимании роли иммунного ответа в патогенезе ВГЛ, многие вопросы до сих пор остаются неясными. К примеру, остаются в большинстве своем неизвестными иммуногенные эпитопы хантавирусов, вызывающих иммунный ответ. Также, неизвестно существование различий между вирусными эпитопами, вызывающими иммунный ответ у больных с легкой и тяжелой формами ГЛПС. Также, не известны иммуногенные эпитопы вызывающие активацию цитотоксических лимфоцитов. Следует отметить, что знание иммуногенных эпитопов существенно продвинет наши усилия в области разработки вакцины против вируса вызывающего ГЛПС. Выявленные иммуногенные пептиды могут служить вирусными антигенами, активирующими иммунный ответ и позволяющими индуцировать стойкий специфический иммунитет. В этой связи нами будет создана библиотека перекрывающихся пептидов, кодирующих N белок нескольких вирусов семейства хантавирусов, включая вирусы Пумала, Хантаан, Добрава, Проспект Хилл и Андес. Далее, сыворотки от больных ГЛПС будут проанализированны на наличие иммунореактивности с библиотеками перекрывающихся пептидов, кодирующих N белок выше указанных вирусов. Также, будут получены результаты по выявлению пептидов, вызывающих активацию цитотоксических лимфоцитов у больных, переболевших ГЛПС. Нами планируется использование нескольких штаммов хантавирусов, которые циркулируют в различных частях мира. Также эти вирусы характеризуются различной степенью тяжести заболевания, клиническими проявлениями и уровнем смертности (Kidney Int. 2013 Jan;83(1):23-7.; Curr Mol Med. 2005 Dec;5(8):773-90.; Cell Tissue Res. 2014 Mar;355(3):621-33). Интересным является тот факт, что обнаружение кросс-реактивности между сыворотками от больных ГЛПС и пептидами от различных штаммов хантавирусов поможет выявить пептиды - кандидаты обладающие потенциальной протекторной способностью против заражения различными штаммами хантавирусов. Таким образом, появится возможность разработка полипотентной вакцины, способной защитить от заражения вирусами, циркулирующими в различных частях мира. В продолжение наших исследований в области патогенеза ГЛПС и влиянии иммунного ответа на тяжесть заболевания, возможности осложнений и смертельного исхода, нами будет проведен корреляционный анализ между активацией цитокинов в сыворотке, тяжестью заболевания и реактивность с пептидами из библиотеки для выявления наиболее иммуногенных пептидов и пептидов с высокой защитной активностью.

 

ОТЧЁТНЫЕ МАТЕРИАЛЫ

Аннотация результатов, полученных в 2015 году
В рамках первого этапа выполнения проекта с использованием технологии клонирования Gateway нами были получены экспрессионные лентивирусные конструкции, кодирующие структурные белки вирусов-возбудителей геморрагических лихорадок. Полученными рекомбинантными лентивирусами инфицировали первичную культуру эндотелиальных клеток из пупочной вены. Нами были получены культуры клеток из пупочной вены человека, сверх-экспрессирующие структурные гены хантавирусов. Нами впервые показано, что аккумуляция тромбоспондина в культуре эндотелиальных клеток при инфицировании хантавирусами носит штамм-специфичный характер. При инфицировании клеток лентивирусами, кодирующими S-cегмент вирусов Андес и Хантаан, наблюдается снижение биосинтеза тромбоспондина, в то время как при инфицировании вирусом Проспект Хилл наблюдалось значительное накопление тромбоспондина с образованием фибрино-подобных структур. Показано, что HUVEC восприимчивы к инфекции вирусом SNV. Экспрессия N белка и накопление S сегментной РНК были выявлены на ранних стадиях инфицирования. Синтез вирусных белков и накопление вирусной РНК обнаруживaлись на протяжении 72 часов после инфекции. Инфицирование HUVEC сопровождалось накоплением инфекционного вируса в клеточной среде. При анализе цитокинового профиля нами также были выявлены 10 наиболее значимых цитокинов, активирующихся при хантавирусной инфекции: M-CSF, CXCL16, sCD40, CXCL12, CCL22, ИЛ-1а, CCL-21, Ил-12р40, CCL17 и ИЛ-1b.

 

Публикации

1. Muyangwa M., Martynova E.V., Khaiboullina S.F., Morzunov S.P., Rizvanov A.A. Hantaviral proteins: Structure, functions and role in Hantavirus Infection Frontiers in microbiology, Volume 6, Issue NOV, 2015, Article number 1326 (год публикации - 2015) https://doi.org/10.3389/fmicb.2015.01326

2. Svetlana F. Khaiboullina, Sergey P. Morzunov, Stephen C. St. Jeor, Albert A. Rizvanov, Vincent C. Lombardi Hantavirus infection suppresses thrombospondin-1 expression in cultured endothelial cells in a strainspecific manner Frontiers in microbiology, Volume 7, Issue JUL, 19 July 2016, Article number 1077 (год публикации - 2016) https://doi.org/10.3389/fmicb.2016.01077

Аннотация результатов, полученных в 2016 году
В рамках второго этапа выполнения проекта получены библиотеки перекрывающихся пептидов, кодирующие белки нуклеокапсидов и гликопротеинов различных хантавирусов. Созданы уникальные библиотеки перекрывающихся пептидов белков гликопротеида и нуклеокапсида хантавируса Пуумала (размер пептида – 15 аминокислот, область перекрытия 5 аминокислот), который является преобладающим штаммом в Республике Татарстан. Проведен первый пилотный эксперимент по идентификации иммуногенных эпитопов в сыворотке крови пациентов с подтвержденным диагнозом ГЛПС. Методом иммуноферментного анализа с последующей статистической обработкой нами был выявлен значимый иммунный ответ на белки карбоксильного конца белка нуклеокапсида и гликопротеина G2. В результате выравнивания аминокислотных последовательностей нами были установлены потенциальные антигенные участки N-белка (RKSSF, RRTQS, DQRII и EWGKE) и гликопротеина G2 (NLVRG, IVGKG, KFMCC, SSTGL и HLDRV). Выявлены потенциальные маркеры-активаторы, а именно ряд TLR рецепторов, увеличение экспрессии которых было статистически достоверно при инфицировании культуры клеток HUVEC различными штаммами хантавирусов. В результате анализа данных ПЦР-РВ показано увеличение экспрессии мРНК TLR7 при инфицировании LV-AND-M (в 1009 раз), LV-HTV-S (в 1896 раз), LV-CCHF-S и LV-Puu-S (647-755 раз) по сравнению с нетрансфицированным контролем. Впервые показано, что различия в уровне экспрессии мРНК TLR3 и TLR7 носят штамм-специфичный характер. Также показано, что инфицирование клеток рекомбинантными лентивирусами, содержащими в своем составе структурные элементы белков хантавируса, не способствует активации экспрессии IP10, в отличие от инфекции дикими штаммами хантавирусов. Выявлены потенциальные терапевтические мишени, блокирующие активацию транскрипции вирусной РНК (S-сегмент) вирусов Андес и Проспект Хилл. Так, в случае добавления киРНК TLR3 транскрипция мРНК PHV-S снижается в 64,3 раз. Добавление киРНК TLR3 снижает экспрессию мРНК нуклеокапсида вируса Андес в 35,7 раз. Опираясь на полученные данные, можно предположить TLR3 как терапевтическую мишень для разработки альтернативных подходов терапии ГЛПС. Увеличение триглицеридов в сыворотке крови были повышены у больных ГЛПС. Наши данные свидетельствуют о том, что существует связь между увеличением триглицеридов и тяжелой клинической картиной ГЛПС. Наши данные подтверждают высокую концентрацию триглицеридов в тяжелых случаях ГЛПС по сравнению с контрольной группой. Мы показали, что уровень триглицеридов был значительно увеличен у пациентов мужского пола, которые также имели более высокие показатели степени тяжести по сравнению с NE пациентов женского пола. На самом деле, из 6 пациентов с диагнозом тяжелых осложнений, т.е. имеющих ДВС синдром, 5 были мужчины. Остается определить, могут ли эти расхождения в уровнях холестерина быть связаны с региональными или национальными различиями в уровне липидов в сыворотке крови. Показано, что увеличение сывороточного IFN-gamma и IL-12 связаны с легкой формой ГЛПС. Хотя мало известно о значении триглицеридов и активации цитокинов, общеизвестно, что гиперлипидемия связана с активацией провоспалительных цитокинов, IL-6, в частности. Интересно отметить, что более высокие уровни IL-6 наблюдаются у пациентов с повышенным количеством триглицеридов. Если дело обстоит именно так, наши данные о повышающей регуляции IFN-gamma и IL-12 в умеренных НЭ случаях предполагает защитную роль для Th1-лимфоцитов в сетевом элементе. Мы обнаружили связь между высоким количеством тромбоцитов и такими цитокинами как Th1, IFN-gamma и IL-12 (p40). Таким образом, мы полагаем, что активация Th1-лимфоцитов является защитным механизмом у больных ГЛПС, препятствуя тромбоцитопении. Значительно более высокие уровни VEGF в сыворотке крови были обнаружены у больных ГЛПС с повышенными концентрациями триглицеридов. Важно отметить, что наши данные впервые показали связь между гипертриглицеридемией и повышенным уровнем сывороточного VEGF у больных ГЛПС.

 

Публикации

1. В.А. Анохин, Е.В. Мартынова, В.А. Мартынов, Г.А. Масгутова, А.А. Ризванов, С.Ф.Хайбуллина Increased Expression of Clusterin in Kidney of a Fatal Nephropathia Epidemica Case BioNanoScience, Vol. 6, #4, p.453-456 (год публикации - 2016) https://doi.org/10.1007/s12668-016-0244-7

2. Е.Е. Гаранина, Е.В. Мартынова, В.В. Иванова, Е.В. Охезин, В.Г. Шакирова, В.А. Анохин, С.П. Морзунов, А.А. Ризванов, С.Ф. Хайбуллина Detection of Antibodies Recognizing Puumala Virus Nucleocapsid and Glycoprotein Peptides in NE Serum BioNanoScience, - (год публикации - 2016) https://doi.org/10.1007/s12668-016-0296-8

3. И.И. Салафутдинов, Е.В. Мартынова, С.Ф. Хайбуллина, В.А. Анохин, В.Г. Шакирова, А.А. Ризванов Differences in the Serum VEGF Are Not Associated with Differences in Cytokine Isoforms in Nephropathia Epidemica BioNanoScience, - (год публикации - 2016) https://doi.org/10.1007/s12668-016-0340-8

4. Мартынова Е.В., Валиуллина А.Х., Гусев О.А.,Давидюк Ю.Н., Гаранина Е.Е., Шакирова В.Г.,Хаертынова И., Анохин В.А., Ризванов А.А., Хайбуллина С.Ф. High Triglycerides Are Associated with Low Thrombocyte Counts and High VEGF in Nephropathia Epidemica Journal of Immunology Research, - (год публикации - 2016) https://doi.org/10.1155/2016/8528270

5. Муйангва М., Гаранина Е.Е., Мартынова Е.В., Ризванов А.А. Lentivirus Expression of Hantavirus Nucleocapsid Proteins BioNanoScience, Vol.6, №4, p.403-406 (год публикации - 2016) https://doi.org/10.1007/s12668-016-0250-9

6. Э. Кабве, Ю.Н. Давидюк, С.П. Морзунов, В.Г. Шакирова, В.А. Анохин, Г.Ш. Исаева, Р.К. Исмагилова, С.Ф. Хайбуллина, А.А. Ризванов Genetic Characterization of Small (s)-Segment Genome Puumala Virus Strain Kazan BioNanoScience, - (год публикации - 2016) https://doi.org/10.1007/s12668-016-0338-2

7. Ю.Н. Давидюк, Э.Кабве, С.Ф. Хайбуллина, Р.К. Исмагилова, В.Г. Шакирова, Г.Ш. Исаева, В.Ф. Павелкина, Ю.Г. Ускова, А.А. Ризванов, С.П. Морзунов Genetic Diversity of Puumala Virus Isolates in the Republic of Tatarstan and the Republic of Mordovia BioNanoScience, - (год публикации - 2016) https://doi.org/10.1007/s12668-016-0331-9

Аннотация результатов, полученных в 2017 году
Впервые была установлена взаимосвязь между CCR5-генотипом и длительностью олигурической фазы ГЛПС, количеством тромбоцитов и уровнем матричных металлопротеиназ в сыворотке крови. Сниженная продолжительность олигурической фазы и более высокое содержание тромбоцитов было обнаружено у пациентов с гетерозиготным генотипом Δ32CCR5/wtCCR5 по сравнению с доминантными гомозиготами. Таким образом, в случае гетерозиготного генотипа течение заболевания имеет более мягкий характер. В общей сложности было проведено сравнение по 94 аналитам между пациентами с ГЛПС, имеющими доминантный гомозиготный и гетерозиготный генотип. Статистически значимые различия были выявлены в случае 9 аналитов между доминантными гомозиготами и гетерозиготами: MMP2, MMP3, MMP8, MMP9, MMP10, MMP12, MMP13, IL-9 and IL-32 . Примечательно, что в случае доминантных гомозигот сывороточные уровни IL-9 были выше, а IL-32 ниже по сравнению с гетерозиготами (p=0,014). Сывороточные уровни матричных металлопротеиназ в случае доминантных гомозигот были выше по сравнению с гетерозиготным фенотипом. При проведении статистического анализа с множественным сравнением с использованием пакета RStudio был выявлен пептид N17 (ENKGTRIRFKDDTSF), обуславливающий развитие наиболее интенсивного иммунного ответа в обеих группах пациентов с доминантным гомозиготным и гетерозиготным фенотипом по гену CCR5, p<0,01. В результате иммуноферментного анализа, а также ELISpot анализа нами были выявлены наиболее значимые иммуногенные детерминанты: FQGYYICLVGSSSEP, ITVYCNGMKKVILTK, SAMCYGSTTTNLVRG, NLVRGQNTVHIVGKG. Также был установлен факт кросс-реактивности антител к терминальным участкам нуклеокапсида вирусов Хантаан, Пуумала и Андес.

 

Публикации

1. Малишени М.,Хайбуллина С.Ф.,Ризванов А.А., Така Н., Муреванхема М.,Бейтс М. Clinical Efficacy, Safety, and Immunogenicity of a Live Attenuated Tetravalent Dengue Vaccine (CYD-TDV) in Children: A Systematic Review with Meta-analysis Frontiers in immunology, Frontiers in Immunology. – 2017. – Vol. 8. – Article 863. (год публикации - 2017) https://doi.org/10.3389/fimmu.2017.00863

2. Муйангва М., Гаранина Е.Е. Нарушение эндосомального транспорта приводит к снижению синтеза нуклеокапсидного белка хантавируса Проспект Хилл in vitro Ученые записки Казанского университета, Т. 159, кн. 1 - С. 58–71 (год публикации - 2017)

3. Хайбуллина С.Ф.,Левис С., Морзунов С.П., Мартынова Е.В., Анохин В.А.,Гусев О.А., Сент Джоур С.К., Ломбарди В.К., Ризванов А.А. Serum cytokine profiles differentiating hemorrhagic fever with Renal Syndrome and Hantavirus Pulmonary Syndrome Frontiers in immunology, Frontiers in Immunology. – 2017. – Vol. 8. – Article 567, 10 pages. (год публикации - 2017) https://doi.org/10.3389/fimmu.2017.00567

4. Гаранина Е.Е., Охезин Е.В., Мартынова Е.В., Шакирова В.Г., Ризванов А.А., Хайбуллина С.Ф. Detection of Antibodies in Serum and Lymphocytes of Patients with Hemorraghic Fever with Renal Syndrome Blood, Vol.130, suppl.1, P.4824 (год публикации - 2017)

5. Клетенков К.С.,Валиуллина А.Х.,Мартынова Е.В.,Гусев О.А., Давидюк Ю.Н.,Гаранина Е.Е., Шакирова В.Г.,Хаертынова И.М.,Анохин В.А., Ризванов А.А.,Хайбуллина С.Ф. Positive Correlation between Serum Tryglycerides and Pro-Inflammatory Cytokines in Hemorrhagic Fever with Renal Syndrome Blood, Vol. 130, supp 1: P. 4818 (год публикации - 2017)

Возможность практического использования результатов
Результаты проекта применимы для иммунологии и медицины для разработки вакцин для профилактики хантавирусных инфекций, потенциальными потребителями которых являются фармацевтические компании.